Kifaa cha PCR cha Virusi vya Monkeypox
Maelezo ya bidhaa
Matumizi yaliyokusudiwa
Inatumika kugundua Virusi vya Monkeypox katika seramu ya binadamu au sampuli za rishai ya kidonda kwa kutumia mifumo ya muda halisi ya PCR.
Kanuni ya Mtihani
Bidhaa hii ni mfumo wa upimaji wa PCR wa muda halisi wa Taqman® wa fluorescent.Vianzio mahususi na vichunguzi vimeundwa ili kugundua jeni la F3L la Virusi vya Monkeypox.Udhibiti wa ndani unaolenga jeni iliyohifadhiwa ya binadamu hufuatilia mkusanyiko wa sampuli, utunzaji wa sampuli na mchakato wa PCR wa wakati halisi ili kuepuka matokeo mabaya ya uwongo.Seti hii ni mfumo kamili wa lyophilized uliochanganywa kabisa, unaojumuisha nyenzo zinazohitajika kwa utambuzi wa Virusi vya Monkeypox: kimeng'enya cha kukuza asidi ya nuklei, kimeng'enya cha UDG, bafa ya athari, kitangulizi maalum na uchunguzi.
Yaliyomo Kuu
Vipengele vilivyotolewa vimeorodheshwa kwenye jedwali.
| Vipengele | Kifurushi | Kiungo |
| Virusi vya MonkeypoxLyophilized Premix | Mirija 8 ya PCR× 6 mifuko | Vianzilishi, uchunguzi, Mchanganyiko wa dNTP/dUTP, Mg2+, Taq DNA polymerase, Enzyme ya UDG |
| Udhibiti Chanya wa MPV | 400 μL×1 tube | Mifuatano ya DNA iliyo na jeni inayolengwa |
| Udhibiti Hasi wa MPV | 400 μL×1 tube | Mifuatano ya DNA iliyo na sehemu ya jeni ya binadamu |
| Suluhisho la Kufuta | 1 ml × 1 bomba | Kiimarishaji |
| Cheti cha Kukubaliana | kipande 1 | / |
Mtiririko wa Operesheni
1. SampuliMkusanyiko:Sampuli inapaswa kukusanywa kwenye zilizopo za kuzaa kwa mujibu
na vipimo vya kiufundi vya kawaida.
2. Maandalizi ya Kitendanishi (Eneo la Maandalizi ya Kitendanishi)
Toa vipengele vya kit, usawazishe kwenye joto la kawaida kwa matumizi ya kusubiri.
3. Uchakataji wa Sampuli (Eneo la Uchakataji wa Sampuli)
3.1 Uchimbaji wa asidi ya nyuklia
Inapendekezwa kuchukua sampuli za kioevu 200μL, Udhibiti Mzuri na Udhibiti Hasi kwa uchimbaji wa asidi ya nucleic, kulingana na mahitaji na taratibu zinazofanana za vifaa vya uchimbaji wa DNA ya virusi.
3.2 Muyeyusho wa poda ya Lyophilized na kuongeza kiolezo
Tayarisha Virusi vya Monkeypox Lyophilized premix kulingana na idadi ya sampuli.Sampuli moja inahitaji mirija ya PCR iliyo na poda ya awali ya Lyophilized.Udhibiti hasi na udhibiti mzuri unapaswa kutibiwa kama sampuli mbili.
(1) Ongeza Suluhisho la Kuyeyusha la 15μL kwenye kila mirija ya PCR iliyo na mchanganyiko wa Lyophilized, kisha ongeza sampuli zilizotolewa 5μL/ Udhibiti Hasi/Udhibiti Chanya kwenye kila mirija ya PCR mtawalia.
(2) Funika mirija ya PCR vizuri, zungusha mirija ya PCR kwa mkono hadi poda iliyo na lyophilized itayeyushwe kabisa na kuchanganywa, kusanya kioevu hadi chini ya mirija ya PCR kwa kupenyeza papo hapo kwa kasi ya chini.
(3) Iwapo utatumia kifaa cha kawaida cha wakati halisi cha PCR kugundua, basi uhamishe mirija ya PCR moja kwa moja kwenye eneo la ukuzaji;ikiwa unatumia BTK-8 kwa kugundua, basi unahitaji kufanya shughuli zifuatazo: kuhamisha kioevu 10 μL kutoka kwa tube ya PCR hadi kwenye kisima cha majibu cha BTK-8.Tube moja ya PCR inalingana na kisima kimoja kwenye chip.Wakati wa operesheni ya bomba, hakikisha kuwa pipette iko wima digrii 90.Vidokezo vya pipette ya kizuizi cha aerosol vinapaswa kuwekwa katikati ya kisima kwa nguvu ya wastani na kuacha kusukuma pipette inapofikia gear ya kwanza (ili kuepuka Bubbles).Baada ya visima kujazwa, toa utando wa chip ili kufunika visima vyote na kisha chip huhamishiwa kwenye eneo la utambuzi wa ukuzaji.
4. Ukuzaji wa PCR (Eneo la Utambuzi)
4.1 Weka mirija ya PCR/chipu ya mwitikio kwenye tanki la majibu na weka majina ya kila mwitikio vizuri kwa mpangilio unaolingana.
4.2 Mipangilio ya kugundua fluorescence: (1) Virusi vya Monkeypox (FAM);(2) Udhibiti wa Ndani (CY5).
4.3 Endesha itifaki ifuatayo ya baiskeli
Itifaki ya ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
| Hatua | Halijoto | Muda | Mizunguko | |
| 1 | Pre-denaturation | 95℃ | 2 dakika | 1 |
| 2 | Denaturation | 95℃ | 10 s | 45 |
| Annealing, ugani, upatikanaji wa fluorescence | 60 ℃ | 30 s | ||
Itifaki ya BTK-8:
| Hatua | Halijoto | Muda | Mizunguko | |
| 1 | Pre-denaturation | 95℃ | 2 dakika | 1 |
| 2 | Denaturation | 95℃ | 5 s | 45 |
| Annealing, ugani, upatikanaji wa fluorescence | 60 ℃ | 14 kik | ||
5. Uchambuzi wa matokeo (tafadhali rejelea Mwongozo wa Mtumiaji wa Ala)
Baada ya majibu, matokeo yatahifadhiwa kiotomatiki.Bofya "Changanua" ili kuchanganua, na chombo kitatafsiri kiotomati thamani za Ct za kila sampuli kwenye safu wima ya matokeo.Matokeo mabaya na mazuri ya udhibiti yataendana na "6. Udhibiti wa Ubora" ufuatao.
6. Udhibiti wa Ubora
6.1 Udhibiti Hasi: Hakuna Ct au Ct>40 katika chaneli ya FAM, Ct≤40 katika chaneli ya CY5 yenye mkunjo wa kawaida wa ukuzaji.
6.2 Udhibiti Chanya: Ct≤35 katika chaneli ya FAM yenye curve ya kawaida ya ukuzaji, Ct≤40 katika chaneli ya CY5 yenye mkunjo wa kawaida wa ukuzaji.
6.3 Matokeo ni halali ikiwa vigezo vyote hapo juu vimefikiwa.Vinginevyo, matokeo ni batili.
Ufafanuzi wa Matokeo
Matokeo yafuatayo yanawezekana:
| Thamani ya Ct ya kituo cha FAM | Ct thamani ya CY5 channel | Ufafanuzi | |
| 1# | Hakuna Ct au Ct>40 | ≤40 | Monkeypox virusi hasi |
| 2# | ≤40 | Matokeo yoyote | Virusi vya nyani |
| 3# | 40-45 | ≤40 | Jaribio upya;ikiwa bado ni 40 ~ 45, ripoti kama 1# |
| 4# | Hakuna Ct au Ct>40 | Hakuna Ct au Ct>40 | Batili |
KUMBUKA: Ikiwa matokeo batili yatatokea, sampuli inahitaji kukusanywa na kujaribiwa tena.
Taarifa ya Kuagiza
| Jina la bidhaa | Paka.Hapana | Ukubwa | Kielelezo | Maisha ya Rafu | Trans.& Sto.Muda. |
| Kifaa cha PCR cha Virusi vya Monkeypox | B001P-01 | 48 vipimo / kit | Serum/ Exudate ya Lesion | Miezi 12 | -25℃-15℃ |
